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梯度PCR儀操作時對不同模式建立的研究
點擊次數(shù)：1539 更新時間：2022-07-13
梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。PCR反應(yīng)能否成功，退火溫度是關(guān)鍵，梯度PCR儀每個孔的溫度可以在一定范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出適宜的反應(yīng)條件。一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。
梯度PCR儀在一般操作時先打開PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管。蓋好熱蓋。再打開PCR儀的電源，儀器程序開始初始化，需等待幾分鐘。
如何為梯度PCR儀建立梯度模式？
1.點中一個步驟，再點“Option”鍵；
2.點“VeriFlex step”，出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口，輸入6個梯度溫度，溫度下方的“1－2”是指對應(yīng)的1、2兩行加熱孔，全部輸好后，點“Done”確定。注意相鄰的兩個梯度溫度之差大不能超過5℃。
梯度PCR儀漸變模式的建立：
1.點中一個步驟，再點“Option”鍵；
2.點“Auto Delta”，出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口。點“Staring Cycle”，輸入起始循環(huán)數(shù)；點“Delta Temperature”，輸入溫度變化值；點“Delta Time”，輸入時間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR，可以提高PCR反應(yīng)的特異性。例如輸入起始循環(huán)數(shù)為2，溫度變化值為＋0.5℃，時間變化值為＋5s，則表示從第2個循環(huán)開始，每循環(huán)一次升溫0.5℃，時間增加5s。
